河北C57小鼠佐剂免疫方案

    佐剂的作用机制佐剂作用的主要机制有：①改变抗原物理性状，延缓抗原降解和排除，延长抗原在体内潴留时间;②刺激单核-巨噬细胞系统，增强其对抗原的处理和提呈能力;③刺激淋巴细胞的增殖分化，从而增强和扩大免疫应答的能力。佐剂的主要作用有：增加机体对于疫苗的反应，特别是增加抗体的产生，来增强疫苗接种人群对于特定疾病的抵御能力；改善由于年龄（包括婴儿和老人）、疾病（如HIV患者）或其他原因导致疫苗反应能力降低的问题;便于小剂量抗原的使用；减少疫苗的接种次数；增加初始免疫反应速率；用于研发疫苗；减缓抗原的消耗速率等。思格生物开发的免疫佐剂，效果明显，值得推荐。河北C57小鼠佐剂免疫方案

单克隆抗体 (mAb) 常通过小鼠免疫后杂交瘤筛选或单个 B 细胞筛选发现。使用具有全人可变区的转基因小鼠，能够通过小鼠免疫和筛选发现全人mAb。然而，通过联合使用不同的抗原制剂、佐剂、注射部位和进行免疫的方式很多。不同的免疫方法已被证明可刺激不同的免疫反应，影响所得抗体的滴度和特性。然而，不同的免疫方案对抗体库应答的影响程度尚未得到充分表征，部分原因是难以表征不同的抗体库。为了确定抗体库序列多样性，可以通过批量 B 细胞的高通量测序获得单个重链和轻链序列。然而，这些方法的实用性有限，因为重链和轻链免疫球蛋白 (Ig) 不是天然配对的。天然 Ig 配对是抗体功能表征的要求。通常，将小鼠 B 细胞融合到杂交瘤中可用于功能筛选，但即使是自动化，这也是一个缓慢的过程，不能表征小鼠库。测序前将单个杂交瘤或 B 细胞单细胞铺板到单个孔中，可以将重链和轻链序列联系起来，但这类方法也不适合用于成千上万的抗体，为了表征不同库中的结合效果，开发了重建适合高通量筛选和测序的重组、天然配对抗体文库的技术可以解决这一问题。北京氢氧化铝佐剂技术指导要想抗体筛的好，首先就要免得好，佐剂很重要。

  中和性抗HIV抗体对于HIV疫苗接种，靶向HIV-1糖蛋白120[56](gp120)上CD4结合位点的VRC01类抗体是中和抗体之一。这些抗体具有共同的特征，包括IGHV1-2基因与轻链配对的高度保守使用，具有5个氨基酸中的短互补决定区3。VRC01抗体的轻链通常由κ基因编码，尽管也报告了与λ的一些组合。结构研究发现，IGHV1-2*02编码重链中的Trp50、Asn58、Arg71和Trp100B通过氢键(Trp50-Asn280gp120；Asn58-Arg456gp120；Trp100B-Asn279gp120)和盐桥(Arg71-Asp368gp120)与gp120表位的保守残基形成接触。由于IGHV1-2等位基因之间的差异，产生VRC01类BCR的能力取决于个体基因型中的等位基因。发现等位基因IGHV1-2*05与产生VRC01类BCR不相容，可能是由于50位氨基酸残基的差异，其中IGHV1-2*05含有Arg50而不是Trp50。在Lee及其同事的一项研究中，作者表明，尽管IGHV1-2*04含有关键残基Trp50，但IGHV1-2*04杂合子个体的VRC01前体幼稚B细胞数量较少。其原因尚不清楚，因为等位基因*02和*04之间的***差异位于66位的框架区3（*02中的Arg和*04中的Trp）。由于IGHV1-2等位基因减少或妨碍产生VRC01类抗体的机会在人群中相对常见，因此并非所有个体均能产生靶向HIV-1gp120表位的***中和抗体。

    TLR5是识别细菌鞭毛蛋白的受体，由几种免疫细胞表达。与配体的连接引起炎症通路的激发和许多炎症介质如TNF-、IL-1、IL-6和一氧化氮的释放]。此外，鞭毛蛋白能够引起Th1和Th2应答，与其他TLR配体不同，其*能够诱导Th1应答。此外，鞭毛蛋白通过激发NLRC4炎症小体诱导IL-1的产生和释放。鞭毛蛋白能够在TLR5或NLRC4非依赖性模型中发挥佐剂活性，但效率低于野生型。事实上，当小鼠模型中不存在这两种受体时，佐剂能力降低，这表明为了驱动免疫应答，至少需要存在一种受体；这两种受体的存在提供了比较好的免疫结果。研究表明，鞭毛蛋白在免疫功能低下人群（例如HIV+患者）中可维持其佐剂能力。Cui等人综述了所有使用鞭毛蛋白作为佐剂的研究。简单的方法是与抗原一起给药；这种简单的方法成功诱导了对预防呼吸道和胃肠道至关重要的粘膜免疫应答。已经进行了许多研究，尤其是关于鞭毛蛋白作为流感疫苗佐剂的作用。在这些研究中，将鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白与不同的流感抗原联合使用，其中灭活的PR8流感病毒(IPR8)、HA(H5N1)和禽流感病毒(AIV)H5N1，并对每一种抗原都获得了强大的免疫反应（尤其是产生IgA的黏膜）。免疫检查点抗原免疫，推荐用思格生物的水溶性小鼠免疫佐剂，保护抗原结构，免疫效果明显。

思格小鼠免疫佐剂特点：水溶性佐剂，不需要乳化等繁琐操作，使用方便。➢可采用腹腔注射方式免疫小鼠，对动物实验人员操作要求低，操作简单。➢免疫强度高，比传统弗氏佐剂产生更高滴度血清抗体。➢对于与鼠同源性高的抗原，或免疫原性低的抗原依然可以成功免疫小鼠获得有效抗体。➢有效保护抗原空间结构，使动物产生更多识别空间结构表位的抗体。使用方法：将抗原用PBS 或生理盐水稀释至相应体积，抗原溶液与佐剂按体积1:1 比例混合。将抗原/佐剂混合液放置在37℃ 震荡摇床上，中低转速60~80rpm/min, 孵育35min。每只小鼠每次免疫200ul 抗原/佐剂混合液，免疫方式为腹腔免疫百万血清效价佐剂，优先思格小鼠免疫佐剂。浙江CpG免疫佐剂生产产地

小鼠免疫佐剂可以有效提高免疫血清效价滴度。河北C57小鼠佐剂免疫方案

TLR1/2 激动剂在佐剂中，L-pampo是一种有效佐剂系统，分别由 Pam3Csk4(Pam3) 和聚肌胞：聚胞苷酸 (polyI:C)、有效 TLR1/2 和 TLR3 激动剂组成。在 一项研究中。L-pampo诱导的抗 HBV 抗体产生强于明矾，还涉及多功能CD4 + T细胞增加等细胞介导的免疫反应。此外，还研究了 L-pampo 作为抗 SARS-CoV-2 的有效佐剂。具体来说，与使用的佐剂相比，SARS-CoV-2抗原（如受体结合域 (RBD) 和 S1 抗原或 RBD-Fc 联合左旋泵）可刺激抗 SARS-CoV-2 的强烈体液和细胞免疫应答。而且，细菌脂蛋白是TLR2识别的作用较强的配体。研究表明，来源于细菌脂蛋白的合成脂肽是B细胞和巨噬细胞的强激动剂，可用作疫苗佐剂。来自发酵支原体的2kDa巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)通过TLR2和MyD88依赖性信号通路刺激免疫细胞。除MALP-2外，Pam2CSK4和Pam3CSK4是公认的TLR2激动剂，它们已被评估为抗侵染性疾病的药物，如利什曼原虫、疟疾和流感。河北C57小鼠佐剂免疫方案